Повторный диагноз covid-19: «обломки» вируса, долгая болезнь, новое заражение

Откуда взялся коронавирус?

С коронавирусами наша иммунная система знакома давно.

На протяжении многих лет ОРВИ, вызываемые ими, ничем не отличались от ОРВИ, вызываемых другими респираторными вирусами: невысокая температура, небольшой кашель, насморк, першение в горле.

Попил водички, поел жаропонижающего, попшикал себе в нос чего-нибудь сосудосуживающего, пополоскал горло, и через несколько дней ты уже чувствуешь себя человеком.

Но в начале 21 века некоторые штаммы вируса мутировали.

В 2002 году в Китае коронавирус вызвал вспышку атипичной пневмонии, захватившую впоследствии 37 стран мира. Она получила название Тяжелого Острого Респираторного Синдрома, или ТОРС.

По-английски он обозначается аббревиатурой SARS-Сov — Severe acute respiratory syndrome coronavirus.

В 2012 году что-то похожее вспыхнуло на Ближнем Востоке (в Саудовской Аравии), а затем перекинулось на другие страны, включая Европу.

Эту инфекцию назвали MERC-Cov (Middle East respiratory syndrome coronavirus), что в переводе означает «ближневосточный респираторный синдром, вызванный коронавирусом».

Россию эта участь миновала и в том, и в другом случае.

Заболеваемость тогда, по сравнению с нынешней, была смешной. Но зато умирало порядка 30-40% заболевших.

И вот – снова «здрасте».

Теперь уже полыхает и закрывается на карантин весь мир, хотя многие болеют легко, а процентов у 40 зараженных инфекция протекает и вовсе бессимптомно.

Но у некоторых пациентов опять развивается тяжелый респираторный синдром, как и в 2002 году. В связи с этим ему присваивают то же имя, что и тогда, только с циферкой 2 на конце: SARS-Сov2.

К чему я это вам говорю?

Чтобы вы знали, что означает аббревиатура SARS, т.к. она встречается во многих публикациях и отражает суть заболевания при неблагоприятном развитии событий.

Еще раз: в переводе с английского это «тяжелый острый респираторный синдром».

Есть версия, что этот коронавирус создали искусственно в какой-то лаборатории, а затем по чьей-то оплошности он вырвался на свободу и начал подыскивать себе жилье, т.е. живые клетки, поскольку может размножаться только там.

Не исключаю этого, учитывая греховную до мозга костей природу человека и его стремление уничтожать себе подобных любым способом: словом, огнестрельным, ядерным или холодным оружием, вирусом-бактерией или отравляющим веществом.

А дальше все происходило по законам эпидемиологического жанра.

Один заразился, подышал, покашлял или чихнул на пару-тройку других.

Те тоже подышали, покашляли или чихнули на пару-тройку следующих.

А может, поздоровались с кем-то за руку, на которую до этого чихнули или покашляли.

Кто-то из тех своей рукой с оставшимися на ней вирусными частицами почесал нос или облизал палец, чтобы открыть целлофановый пакетик в супермаркете, и коронавирус благополучно пробрался в его организм.

А кто-то из тех, кто уже заражен, но еще не догадывается об этом, пришел в супермаркет, чихнул, прикрыв рот рукой, после чего принялся выбирать яблоки, капусту или бананы.

Количество зараженных стало расти в геометрической прогрессии. От одного единственного человека зачахла вся планета!

Что происходит после попадания вируса в организм?

Коронавирус имеет довольно изощренный способ проникновения в клетки.

На его поверхности есть что-то вроде шипов. Это белки. При соприкосновении с клеточной оболочкой они выдают себя за своих и соединяются с определенными рецепторами.

Рецепторы, ни о чем не подозревая, дают разрешение на вход.

Первым делом вирус вводит в клетку свой генетический материал (РНК).

Клетка получает новую инструкцию, что ей делать дальше. А инструкция велит: «скопировать этот генетический материал и размножить!»

Когда в клетке становится слишком много вирусят, она получает новый приказ: «самоуничтожиться!».

Клетка лопается как мыльный пузырь, и на свободу выходит банда молодых вирусов, каждый из которых имеет одну задачу: проникнуть в новую клетку и наплодить себе подобных, поскольку вне клетки он жить не может.

Рецепторы, с которыми соединяется коронавирус, есть в дыхательных путях, кишечнике, сосудах, сердце, почках. Этим (отчасти) объясняется поражение сразу нескольких органов при тяжелой форме Covid-19.

Но больше всего таких рецепторов в легких.

Репликация

В целях улучшения общего понимания необходимо рассмотреть процесс репликации, в результате которого появляются две идентичные молекулы нуклеиновой кислоты. Так начинается деление клетки.

В ней участвуют ДНК-полимеразы, ДНК-зависимые, РНК-полимеразы и ДНК-лигазы.

Процесс репликации состоит из следующих этапов:

• деспирализация — происходит последовательное раскручивание материнской ДНК, захватывающей всю молекулу;
• разрыв водородных связей, при котором цепи расходятся, и появляется репликативная вилка;
• подстройка дНТФ к освободившимся основаниям материнских цепей;
• отщепление пирофосфатов от дНТФ молекул и образование фосфорнодиэфирных связей за счет выделяющейся энергии;
• респирализация.

После образования дочерней молекулы делится ядро, цитоплазма и остальное. Таким образом, образуются две дочерние клетки, полностью получившие всю генетическую информацию.

Кроме этого, кодируется первичная структура белков, которые в клетке синтезируются. ДНК в этом процессе принимает косвенное участие, а не прямое, заключающееся в том, что именно на ДНК происходит синтез, участвующих в образовании белков, РНК. Этот процесс получил название транскрипции.

А что дальше?

Попав в носоглотку, вирус внедряется в клетки слизистой, вызывая их повреждение. Если защитные механизмы на этом этапе не смогли остановить его, вирус спускается ниже по респираторному тракту. Его путь лежит в легкие.

Иногда тест на Сovid оказывается ложно-отрицательным. Одна из причин этого – вируса в носоглотке уже нет, он спустился в трахею, бронхи или легкие.

Если ему удалось пройти все иммунные кордоны, он добирается до альвеол.

Альвеолы — маленькие пузырьки, в которых происходит газообмен: углекислый газ меняется на кислород. В норме воздух, который мы вдыхаем, поступает в альвеолу и проходит через нее к ее стенке, которая примыкает к легочному капилляру. Кислород из альвеолы проникает через альвеолярную стенку и эндотелий сосуда в кровь и разносится по всему организму.
Углекислый газ идет в обратном направлении: из крови в альвеолу, и мы его выдыхаем.

Что происходит при коронавирусной инфекции?

Коронавирус внедряется в клетки, выстилающие стенки альвеол, вызывая их гибель. Альвеолы заполняются разрушенными клетками и перестают выполнять свои функции.

Что это за функции?

В норме они вырабатывают сурфактант – вещество, благодаря которому их стенки на выдохе не слипаются.

Помимо этого, сурфактант препятствует пропотеванию жидкости из сосудов в альвеолы и развитию отека легкого, оказывает бактерицидное действие, регулирует работу некоторых иммунных клеток.

А если нет сурфактанта, легкие — под угрозой.

Снаружи альвеолы опутаны сетью кровеносных сосудов.

Вирус из альвеол попадает в кровь, а поскольку в сосудах тоже есть рецепторы, к которым он питает нежные чувства, он прикрепляется к ним, проникает в клетки эндотелия сосудов и повреждает его. Развивается воспаление сосудистой стенки — васкулит.

Повышается ее проницаемость. Эритроциты и лимфоциты попадают в альвеолы и заполняют их вместе с погибшими клетками.

Теперь представьте: в норме альвеолы заполнены воздухом. А при ковидной пневмонии – Бог знает чем: погибшими клетками, клетками крови, экссудатом.

Воздух, который вдыхает больной, не может свободно пройти через всё это, чтобы отдать в кровь кислород. А углекислый газ не может удалиться.

Уровень насыщения крови кислородом, т.е. та самая сатурация, которую определяют с помощью пульсоксиметра, падает. Человек задыхается.

В частности, на Covid-19 есть три элемента, которые могут «оправдать» повторное заражение

Первый предусматривает продолжительность инфекции . Есть доказательства, что у некоторых пациентов вирус остается активным в течение длительного периода времени. Таким образом, несмотря на многие неопределенности, положительные результаты были не примерами повторного заражения, а случаями, когда стойкая инфекция не была обнаружена тестами. Как правило, организм вырабатывает антитела примерно через 7-10 дней после контакта с вирусом. В результате, пациенты, излечившиеся от Covid-19, вряд ли снова заразятся так быстро.

Отсюда проблема может быть связана с качеством тестов и так называемыми ложными отрицаниями .

«Позитивные тесты после заживления означают только то, что не особо чувствительные тесты дают ложноотрицательный результат и что пациент все еще инфицирован», — объяснил Дэвид Хуэй, эксперт по респираторной медицине в Китайском университете Гонконга, который также изучал вспышку тяжелого острого респираторного синдрома (Sars) в 2002-2003 гг., вызванного коронавирусом того же семейства, что и Sars-CoV-2.

Второй аспект — положительный тест после заживления может также обнаружить остаточную вирусную РНК, которая остается в организме , однако в количествах, которые не вызывают заболевания, — продолжает Хуэй. Вирусная РНК может сохраняться долго даже после того, как вирус был заблокирован ».

Китайское исследование пациентов с Covid-19, вылеченных в Шэньчжэне, показало, что почти 15% пациентов (38 из 262) дали положительный результат после выписки. Они были подтверждены тестом Pcr (полимеразная цепная реакция), эталонным стандартом для тестов на коронавирус.

Функции РНК

В основе функций рибонуклеиновой кислоты лежат три различных вида РНК.

Информационная передает генетическую информацию от ДНК в цитоплазму ядра. Ее еще называют матричной. Это незамкнутая цепь, синтезирующаяся в ядре при помощи фермента РНК-полимеразы. Несмотря на то что в молекуле ее процентное содержание чрезвычайно низкое ( от трех до пяти процентов клетки), на ней лежит важнейшая функция — являться матрицей для синтеза белков, информируя об их структуре с молекул ДНК. Один белок кодируется одной специфичной ДНК, поэтому их числовое значение равное.

Рибосомная в основном состоит из цитоплазматических гранул — рибосом. Р-РНК синтезируются в ядре. На их долю приходится примерно восемьдесят процентов всей клетки. Этот вид обладает сложной структурой, образовывая петли на комплементарных частях, что ведет к молекулярной самоорганизации в сложное тело. Среди них имеются три типа у прокариот, и четыре — у эукариот.

Транспортная действует в роли «адаптера», выстраивая в соответствующем порядке аминокислоты полипептидной цепи. В среднем, она состоит из восьмидесяти нуклеотидов. В клетке их содержится, как правило, почти пятнадцать процентов. Она предназначена переносить аминокислоты туда, где белок синтезируется. В клетке насчитывается от двадцати до шестидесяти типов транспортной РНК. У них всех — сходная организация в пространстве. Они приобретают структуру, которую называют клеверным листом.

«Я уверен, что они не могли повторно заразиться»

Фото: AP Photo/Mark Schiefelbein

В Китае в последние недели склонны рассматривать «повторно заразившихся» пациентов как «долгосрочно положительных». Это не то же самое, что быть носителем хронической инфекции.

Как правило, долго болеют пожилые люди со слабой иммунной системой и сопутствующими хроническими заболеваниями, сообщил 29 апреля китайскому изданию Global Times директор Института вирусологии Уханьского университета Ян Чжаньцю.

Период разрушения коронавируса у таких пациентов может достигать 60 дней. При этом симптомы респираторного заболевания у них могут отсутствовать, поскольку концентрация вируса в организме очень низкая.

SARS-CoV-2 выявляется повторно даже спустя 70 дней после первой постановки диагноза, сообщил агентству Reuters руководитель одной из больниц в Ухане. Растущее число случаев, когда люди вроде бы выздоравливают, а потом их анализы снова оказываются «положительными» – одна из самых больших проблем для врачей города, где коронавирус впервые был обнаружен в декабре прошлого года, пишет агентство.

Профессор Пол Хантер из Университета Восточной Англии, комментируя выводы китайских медиков, сообщил Reuters, что аналогичное медленное течение коровирусной инфекции или гриппа встречается иногда у пациентов с ослабленным иммунитетом. 

Российские специалисты согласны с тем, что SARS-CoV-2 остается с человеком надолго. «Могу сразу сказать, что очень долго вирус покидает организм. Это правда. И когда человек чувствует себя уже здоровым, он все равно может быть выделителем этого самого вируса», – подчеркнула глава Роспотребнадзора Анна Попова в интервью «России-24».

Может ли оказаться, что люди действительно «подхватывают» коронавирус сразу же после выздоровления?

Врач скорой помощи одной из уханьских больниц Чжао Янь считает, что это невозможно. Пациенты, которых он знает, сначала находились в больнице под пристальным наблюдением, а потом соблюдали карантин. «Я уверен, что они не могли повторно заразиться», – приводит его слова Reuters.

К сожалению, у научного сообщества такой уверенности нет.

Справка
Развитие иммунитета к патогену (микроорганизму, вызывающему болезнь) – это многоступенчатый процесс. Сначала вирусная инфекция приводит к неспецифической врожденной реакции организма, поясняется в документе, опубликованном на сайте ВОЗ.
На этой стадии распространению вируса препятствуют клетки иммунной системы (макрофаги, нейтрофилы и т.п.), призванные поглощать чужеродные частицы. Одновременно вырабатываются интерфероны (белки, подавляющие размножение вируса) и другие вещества, которые защищают организм от любого возбудителя.
Позднее начинается специфическая реакция, когда вырабатываются антитела, направленные против конкретного патогена, в данном случае против SARS-CoV-2. Обычно степень защищенности организма от повторного заражения измеряется количеством именно этих, нейтрализующих вирус антител в крови.

Рибосомальная рибонуклеиновая кислота

Такие молекулы составляют подавляющее большинство клеточных РНК, а именно от восьмидесяти до девяноста процентов от общего количества. Они соединяются с белками и формируют рибосомы — это органоиды, выполняющие синтез белков.

Рибосомы состоят на шестьдесят пять процентов из р-РНК и на тридцать пять процентов из белка. Эта полинуклеотидная цепь без труда изгибается вместе с белком.

Рибосома состоит из аминокислотного и пептидного участков. Они расположены на контактирующих поверхностях.

Рибосомы свободно передвигаются в клетке, синтезируя белки в нужных местах. Они не очень специфичны и могут не только считывать информацию с и-РНК, но и образовывать с ними матрицу.

Живые и мертвые

— Андрей Михайлович, но если чувствительность ПЦР-диагностики всего 70%, то получается, что велик риск ложноположительных и ложноотрицательных тестов?

— Ни один из диагностических методов не обладает абсолютными показателями диагностической эффективности. Процедура подтверждения положительных результатов ПЦР призвана повысить специфичность диагностики. Хотя с учетом опыта, квалификации сотрудников городских лабораторий, которые эти методы практикуют более 15 лет, сложно представить, что при правильном технологическом процессе мы получим ложноположительный результат.

— Что труднее получить — ложноположительный или ложноотрицательный результат?

— Ложноположительный с точки зрения вероятности. С чем связана успешность диагностики? Первое — это подготовка пациента и правильный отбор материала. Если процедура отбора материала, а в нашем случае это соскоб со слизистых глотки и носа, если ее не соблюсти, то мы получим у инфицированного больного отрицательный результат, а по сути он будет ложноотрицательный. Если же материал правильно отобран, содержит микроорганизмы, то в лаборатории получение ложноотрицательного результата связано только лишь с низкой концентрацией возбудителя в материале, когда его недостаточно для детекции. Потому что любой метод, в том числе ПЦР, предполагает минимальную (пороговую) концентрацию микроорганизма, который может определиться.

— Есть масса случаев, когда явно больной коронавирусной инфекцией человек получает только отрицательные тесты. Почему так бывает?

— У пациентов с разными стадиями заболевания и его проявлениями концентрация вируса на слизистых верхних дыхательных путей динамически меняется. На первых этапах и при легком течении максимальная концентрация бывает, как правило, на слизистых, а при тяжелом течении максимальная концентрация возбудителя будет в ткани легких. В этом случае речь идет о необходимости исследования аспирата из бронхов и мокроты. Де-факто для постановки диагноза это уже не принципиально, а процедура бронхоскопии травмоопасна, и для пациента, и для того, кто исследует, есть риск внутрибольничного заражения. Мы с юридической точки зрения полномочны ставить диагноз без ПЦР на основании клинических проявлений и КТ-исследования. Эта позиция обозначена в методических рекомендациях Минздрава.

— Но это создает сложности при окончательной постановке диагноза, вам не кажется?

— У нас по национальной классификации болезней в России есть лабораторно подтвержденные и не подтвержденные случаи COVID-19. Поэтому здесь вопрос — в достижении межведомственного консенсуса между Минздравом и Роспотребнадзором. И на самом деле, и это не мое частное мнение, что этого консенсусного руководящего документа у нас нет, а, по идее, это должен быть единый документ. Не только постановления главного санитарного врача и временные методические рекомендации Минздрава, а единый документ.

Разновидности тестирования и расшифровка результатов

Хроническую стадию заболевания печени сопровождают признаки фиброза с разрастанием соединительных тканей, что со временем нарушает структуру органа. Если вовремя начать лечение, повышается вероятность обратимости фиброза. Именно для выбора адекватной терапии важен учет результатов диагностики HCV, выполняемой поэтапно:

• Сначала методом качественного тестирования пытаются обнаружить следы вируса.
• Результаты количественного теста уточняют концентрацию в пробе вирусной РНК.
• Методом генотипирования устанавливают, к какому генотипу принадлежит возбудитель.

Ряд медиков считает диагностику на РНК вирусного гепатита обязательной для большинства пациентов, даже не имеющих характерных для патологии симптомов. Появление определенных жалоб уже свидетельствует о запущенном процессе с поражением печени циррозом, некрозом, онкологией.

В домашних условиях можно самостоятельно выполнить несложную диагностику гепатита, пользуясь экспресс-тестом ИФА. Тестовый комплект позволяет определить наличие антител к РНК вируса всего за 15 минут по капле крови. При выявлении антител потребуется дальнейшее обследование.

Задача начального этапа исследования – подтвердить наличие в тестируемом объеме генетических фрагментов HCV, если анализ крови показал наличие у пациента антител, готовых атаковать вирус гепатита С

Интерпретация результатов качественной диагностики имеет две позиции, с их особенностями важно ознакомиться:

1. «РНК обнаружено». Положительный вариант результата указывает, что биологическая жидкость содержит фрагменты РНК возбудителя гепатита. Интерпретация показателя является подтверждением факта инфицирования: вирус размножается в крови носителя, печень подвергается разрушению.
2. «РНК не обнаружено». При отрицательном варианте результата сохраняется вероятность малой концентрации вирусной РНК даже при явном отсутствии ее фрагментов. Тест не сможет выявить ничтожную концентрацию вирионов при недавнем заражении либо предшествовавшей противовирусной терапии.

Обнаружения РНК возбудителя по методике качественного тестирования, обеспечивающего 95% точности, достаточно для подтверждения гепатита С. Достоверность качественного этапа анализа ПЦР обеспечивает система с определенным порогом чувствительности (до 500 МЕ/мл).

При низкой виремии (концентрация вируса) потребуется помощь диагностической системы с показателем минимум 50 МЕ/мл. По результатам следующей части анализа определяют концентрацию вирионов в объеме исследуемого биоматериала.

Антитела: много неясного

— Много споров про тесты на антитела.

— Мы не знаем, как долго они циркулируют, как часто надо проводить исследование. Мы сейчас проводим совместное многоцентровое исследование в разных регионах страны на предмет выяснения динамики противоковидных антител после перенесенной инфекции. Но пока прошло слишком мало времени, чтобы говорить об окончательных выводах.

Второй момент: это же положение было продублировано в последних, седьмых, рекомендациях Минздрава — что тестировать методом ПЦР необходимо до появления иммуноглобулинов IgG. Но там отдельно есть абзац, который допускает использование экспресс-тестов для обследования пациентов, поступающих в медицинские организации для оказания плановой медицинской помощи. Но алгоритмов проведения обследования и интерпретации результатов, а также передачи результатов анализа в Роспотребнадзор нет. Поэтому пока по факту это положение рекомендаций не реализуется, потому что в медицинской и научной среде на самом деле есть разночтения.

— Насколько они информативны, почему их часто не обнаруживают у переболевших людей?

— И тут мы переходим к базовой основе использования методов обнаружения антител применительно к COVID-19. Прогнозы диагностической информативности определения специфических антимикробных антител при COVID-19 сформулированы на нашем опыте диагностики применительно к другим инфекциям (ВИЧ, вирусные гепатиты, грипп и др.), и они предполагают определенную закономерную динамику выработки антител. В чем это заключается?

На первом этапе на 5-7-е сутки инфекционного процесса появляются иммуноглобулины класса М, а через 10–14 дней — класса G. Исходя из этого были спрогнозированы алгоритмы интерпретации. Но практика показала, что при COVID-19 иммунный ответ искажается, становится другим. И эти закономерности не всегда выявляются.

— И что это означает?

— Речь может идти об иммунотропности вируса, о способности поражать клетки иммунной системы, которые участвуют в противоинфекционном ответе. И мы видим, что такая иммунотропность присутствует, она носит индивидуальный характер. То есть в ряде случаев мы видим пациентов, которые перенесли инфекцию, у них появились иммуноглобулины М, потом G, то есть реализовалась минимальная иммунотропность. А в ряде случаев даже при появлении клинической картины антитела не вырабатываются, и это связано с индивидуальной чувствительностью к вирусу. И это крайности, а между ними возможен целый спектр вариантов. Например, в одной из крупных клиник Петербурга проверили всех медиков, достоверно переболевших коронавирусной инфекцией, и антитела нашли лишь у 10%. Также существуют сведения об исчезновении специфических антител к вирусу в течение трех месяцев после выздоровления.

Куда смотрит иммунная система?

Когда в организм попадает чужой агент и начинает повреждать эпителий слизистой, к месту повреждения стягиваются главные пожиратели незваных гостей — макрофаги. Они вырабатывают цитокины — белки, обеспечивающие передачу сигналов SOS другим клеткам иммунной системы.

Самые популярные цитокины – интерфероны.

Менее популярные – интерлейкины, хемокины, факторы некроза опухоли и др.

Одни цитокины запускают воспаление, чтобы локализовать очаг повреждения, другие его сдерживают, иначе воспалительная реакция станет неприлично бурной, воспаление выйдет из-под контроля, и тогда пиши пропало.

Иногда так и случается.

По непонятным причинам в организме начинается настоящий хаос.

Цитокины словно срываются с цепи. Иммунная система полностью теряет способность различать свое и чужое и атакует все подряд: и врага, и собственные ткани.

Развивается, так называемый, цитокиновый шторм.

Воспаление усиливается, захватывая новые участки легких.

Под раздачу попадают клетки крови нейтрофилы. При распаде они выделяют ферменты, разрушающие эритроциты и тромбоциты. Возникают тромбозы и кровотечения, падает давление, расширяются сосуды, развивается обширный легочный отек. Выходят из строя сердце, легкие, почки, печень. Это называется полиорганной недостаточностью.

Если срочно не приструнить ошалевшую иммунную систему, она убьет хозяина.

Чаще цитокиновый шторм проявляется через 8-10 дней от начала заболевания.

Его признаки:

• Скачок температуры до 39 градусов и выше.
• Резкая слабость, вялость.
• Боли в мышцах.
• Сознание «как в тумане».
• Ощущение сдавливания грудной клетки.
• Падение АД – головокружение, потемнение в глазах.

Справиться с ним можно только в стационаре.

В такой ситуации назначают иммуносупрессоры, чтобы быстро снять гиперактивность иммунной системы, иначе беды не миновать.

Итак, при тяжелом течении коронавирусной инфекции мы имеем:

1. Повреждение альвеол.
2. Повреждение интерстиция – соединительной ткани, окружающей альвеолы.
3. Множественные повреждения сосудов с образованием в них тромбов.
4. Сверхсильный иммунный ответ.

Самое печальное во всем этом, что невозможно предугадать, как будет протекать заболевание. Если в начале пандемии говорили, что тяжелые больные – те, которым перевалило за 60-65, то сейчас ясно, что от этого не застрахованы и молодые.

Но если есть риск цитокинового шторма, то зачем всем повально назначают противовирусные средства с иммуностимулирующим эффектом?

Кто-то из вас сейчас скажет:

«Теперь я вообще ничего не понимаю! Антибиотики не имеют смысла, иммуномодуляторы могут нанести вред. Чем лечить? Что рекомендовать?»

Отличная тема для размышлений и рассуждений! Будем думать.

На сегодня все.

В следующий раз разберем, почему при Covid-19 появляется тот или иной симптом, и поговорим о тестах на коронавирус.

До новой встречи на блоге «Аптека для Человека»!

С любовью к вам, Марина Кузнецова

P.S. Если вы — сотрудник аптеки и хотите быть в курсе новостей блога, а также получить полезные для работы шпаргалки, подписывайтесь на рассылку! Форма подписки — в правой колонке и под каждой статьей.

Альтернатива ПЦР-диагностике

В любом случае нужно повышать чувствительность тест-систем на основе ПЦР, заключает Алексей Чемерис, а для этого нужны другие подходы. «Надо сделать так, чтобы ложнонегативных результатов было меньше, практически исключить их», — считает он.

В обзоре, подготовленном вместе с коллегами, профессор Чемерис рассматривает преимущества и недостатки ПЦР-диагностики и других методов амплификации — копировании РНК бетакоронавирусов, к которым относится SARS-CoV-2. Теоретически весьма перспективен метод петлевой амплификации — LAMP, где используют сразу шесть или восемь праймеров.

«С одной стороны, повышается специфичность: только когда все праймеры отожгутся (сработают, распознав РНК коронавируса. — Прим. ред.), начнется амплификация, с другой — вирус мутирует и шансы, что реакция не пойдет, увеличиваются, поскольку какие бы участки генома ни выбрать, все равно вероятность мутаций больше в восьми участках, чем в двух или трех (при использовании гибридизационного зонда), достаточных для ПЦР», — объясняет исследователь.

Во время предшествующей эпидемии SARS возбудителя выявляли с помощью реакции NASBA (амплификации на основе секвенирования нуклеиновых кислот) и RCA (репликации по типу катящегося кольца). Геномный редактор CRISPR-Cas также пробуют применять для идентификации РНК нового коронавируса. Есть работы по полногеномному секвенированию любого генетического материала, находящегося в биоматериале. Метод очень чувствительный, но дорогой и долгий — занимает 20 часов. Так что в ближайшее время ПЦР с обратной транскрипцией останется самым массовым способом обнаружения коронавируса в организме.

НЕ СОБЛЮДЕНЫ ПОСТУЛАТЫ КОХА

Кроме того, нет научных доказательств того, что эти последовательности РНК являются возбудителем того, что называется COVID-19.

Чтобы установить причинную связь, так или иначе, то есть помимо выделения и очистки вируса, было бы абсолютно необходимо провести эксперимент, который удовлетворял бы четырем постулатам Коха. 

1. Микроорганизм/вирус постоянно встречается в организме больных людей (или животных) и отсутствует у здоровых.
2. Микроорганизм/вирус должен быть изолирован от больного человека (или животного) и его штамм должен быть выращен в чистой культуре.Чтобы только выделить его каждый раз нужны огромные средства.
3. При заражении чистой культурой микроорганизма/вируса здоровый человек (или животное) заболевает. Кто это делал: заражал людей, да никто, это невозможно. А животные не дадут четкой картины.
4. Микроорганизм/вирус должен быть повторно изолирован от экспериментально заражённого человека (или животного).

Но такого эксперимента нет и не было, как недавно рассказали Эмори Деверо и Розмари Фрей.

Одним из примеров является исследование, опубликованное в журнале Nature 7 мая . Это испытание, помимо других процедур, делающих исследование недействительным, не соответствовало ни одному из постулатов.

Например, у предполагаемых «инфицированных» лабораторных мышей не было выявлено каких-либо значимых клинических симптомов, явно связанных с пневмонией, которая, согласно третьему постулату, должна действительно возникнуть, если там действительно бы действовал опасный и потенциально смертельный вирус. А легкая взерошенность и потеря веса, которые временно наблюдались у животных, незначительны не только потому, что они могли быть вызваны самой процедурой укола неизвестным организму веществом, но также итот факт. что вес снова вернулся к норме.

Показательно, что ни один из ведущих немецких представителей официальной теории SARS-Cov-2 / COVID-19: — Институт Роберта Коха (RKI), Александр С. Кекуле (Университет Галле), Хартмут Хенгель и Ральф Бартеншлагер (Немецкое общество) по вирусологии), вышеупомянутые Томас Лёшер, Ульрих Дирнагл (Шарите Берлин) или Георг Борнкамм (вирусолог и почетный профессор Гельмгольц-центра Мюнхена) — могли бы ответить на следующий вопрос, который им отправили:

Если частицы, которые, как утверждается, принадлежат к SARS-CoV-2, не были очищены, как вы хотите быть в этом уверены, что последовательности генов РНК этих частиц принадлежат конкретному новому вирусу?

В частности, если есть исследования, показывающие, что вещества, такие как антибиотики, которые добавляются в пробирки в экспериментах in vitro, проводимых для обнаружения вирусов, могут «подвергать стрессу» культуру клеток таким образом, что образуются новые последовательности генов, которые ранее не были обнаружены — как аспект, на который лауреат Нобелевской премии Барбара МакКлинток уже обращала внимание в своей Нобелевской лекции еще в 1983 году . Но мы не получили ответов до 18 июня 2020 года, после нескольких месяцев отсутствия ответа. В конце концов, мы добились этого только с помощью берлинского юриста Вивиан Фишер

Но мы не получили ответов до 18 июня 2020 года, после нескольких месяцев отсутствия ответа. В конце концов, мы добились этого только с помощью берлинского юриста Вивиан Фишер.

Шарите признает, что они не использовали очищенные частицы.

Вирусологи из клиники Шарите заявляют:

Это означает, что они просто предположили, что РНК была вирусной .

Между прочим, Corman et al. Документ, опубликованный 23 января 2020 года, даже не прошел надлежащего процесса рецензирования, и описанные в нем процедуры не сопровождались контролем — хотя только благодаря этим двум вещам научная работа становится действительно научной.

Что показывает анализ?

Определение РНК нужен, чтобы узнать, есть ли в крови вирусные клетки. Содержимое ядра этого возбудителя имеет морфологические особенности строения, уникальное соединение нуклеотидов между собой, что выявляется ультра микроскопическим методом. Понятие «качественно» обозначает не высокий уровень исследования, а то, что результаты анализа не обозначаются в числовых показателях, а говорят лишь о наличии или отсутствии возбудителя гепатита в кровеносном русле.

Альтернативный метод для биопсии. Эта методика за 10 лет развития постоянно усовершенствуется и дает более точные результаты. Следует отметить, что вирусы постоянно мутируют с появлением новых подвидов. Существует 6 видов различных по структуре генотипов гепатита С, что значительно усложняет интерпретацию результатов обследования. Чтобы выявить все патологические частицы, нужно уметь различать и распознать эти генотипы. Для этого используется множество реактивов и приспособлений, способных выявить мельчайшие вирусы на ранних этапах развития.

Норма количественного исследования РНК вируса гепатита С

Нормальным результатом количественного анализа на гепатит С для здорового человека считается полное отсутствие вируса в крови. На это должен указать качественный анализ, он проводится пациентам, у которых обнаружены антитела к вирусу.

Нормой при расшифровке анализов на гепатит С считается — «вирус не обнаружен».

Если количественный анализ с расшифровкой показал результат меньше 400 тыс. МЕ/мл, можно говорить о минимальной концентрации вируса в крови, но не об отсутствии заболевания.

Нагрузку более 800 тыс. МЕ/мл определяют как высокую. Однако среди специалистов нет согласия в определении минимальной и максимальной концентраций.

Границей считают 400 тыс. МЕ/мл.

Особенности тестирования на дому

Для сдачи подобного рода анализа следует заранее договориться о выезде бригады или специалиста лаборатории, имеющей лицензию на проведение диагностики коронавируса COVID-19. Есть нюанс: частные лаборатории оказывают подобную услугу только особам, у которых отсутствуют признаки ОРВИ, и платно (около 1300 рублей, не считая затраты на выезд медицинского сотрудника и забор биоматериала).

В государственных лабораториях теоретически можно сделать тест бесплатно, но только при условии нахождения в группе риска и наличия направления врача. Тест в срочном порядке рекомендован следующим лицам:

• медицинским работникам, обсуживающим пациентов с наличием/подозрением на КОВИД;
• при возникновении симптоматики КВИ (гипертермия, одышка, сухой кашель, заложенность носа, потеря обоняния и снижение работы вкусового анализатора, затрудненное дыхание), если экспресс-тест на грипп оказался отрицательным;
• лицам, не имеющим признаков КОВИД-19, но контактирующим с подтвержденным больным;
• перед перелетом и по возвращении в страну;
• при госпитализации в стационар (по любой причине) и перед проведением плановой операции.

Когда не нужно проводить экспресс-тест:

• контакт с возможным носителем инфекции был менее 5 дней назад;
• положительный результат экспресс-анализа на грипп;
• отсутствие симптоматики, хорошее самочувствие, отсутствие оснований предполагать контакт с больным коронавирусом.

Необходимый биоматериал – отделяемое с поверхности носо- и ротоглотки. Результаты готовы в течение 3-7 дней.